books determination of amino acid composition
If you do not find what you're looking for, you can use more accurate words.
تحديد تكوين الأحماض الأمينية (Info)
غالبا ما يكون من المرغوب فيه معرفة تركيبة الأحماض الأمينية غير المرتبة للبروتين قبل محاولة العثور على التسلسل المرتب، حيث يمكن استخدام هذه المعرفة لتسهيل اكتشاف الأخطاء في عملية التسلسل أو للتمييز بين النتائج الغامضة. ويمكن أيضا معرفة تواتر بعض الأحماض الأمينية المستخدمة لاختيار أي البروتياز لاستخدامها في عملية الهضم من البروتين. ويمكن أيضا أن يكون سوء التفسير من انخفاض مستويات الأحماض الأمينية غير القياسية (على سبيل المثال نوريلوسين) في البروتينات التي يتم تحديدها.
[1] الطريقة العامة التي يشار إليها غالباً باسم تحليل الأحماض الأمينية [2] لتحديد تردد الحمض الأميني هي كما يلي:
- تحليل المائي لكمية معروفة من البروتين في الأحماض الأمينية المكونة لها.
- فصل وتحديد كمية الأحماض الأمينية في بعض الطريق.
التحلل المائي
تتم عملية التحلل المائي عن طريق تسخين عينة من البروتين في حمض الهيدروكلوريك M 6 إلى 100-110 درجة مئوية لمدة 24 ساعة أو أكثر. قد تتطلب البروتينات التي تحتوي على العديد من مجموعات الهيدروفوبية الضخمة فترات تسخين أطول. ومع ذلك، فإن هذه الظروف قوية للغاية لدرجة أن بعض الأحماض الأمينية (سيرين، ثريونين، تيروزين، تريبتوفان، جلوتامين، وسيستين) متدهورة. للتحايل على هذه المشكلة، يقترح Biochemistry Online تسخين عينات منفصلة لأوقات مختلفة، وتحليل كل حل ناتج، واستقراء إلى وقت عدم التحلل. يقترح راستول مجموعة متنوعة من الكواشف لمنع أو الحد من التدهور، مثل الكواشف ثيول أو الفينول لحماية التربتوفان والتيروزين من هجوم الكلور، وقبل السيستين. كما يقترح أيضًا قياس كمية الأمونيا المتطورة لتحديد مدى تحلل الأميد.
الفصل والكميه
يمكن فصل الأحماض الأمينية عن طريق كروماتوغرافيا التبادل الأيوني ثم اشتقاقها لتسهيل اكتشافها. أكثر شيوعا، يتم اشتقاق الأحماض الأمينية ثم حلها عن طريق مرحلة عكسية HPLC.
يتم إعطاء مثال على اللوني التبادل الأيوني من قبل NTRC باستخدام polycyated polystyrene كمصفوفة، مضيفا الأحماض الأمينية في المحاليل الحمضية ويمر حاجز من زيادة درجة الحموضة بشكل مطرد من خلال العمود. تتم إزالة الأحماض الأمينية عندما يصل الرقم الهيدروجيني إلى نقاط كهروضوئية كل منها. بمجرد فصل الأحماض الأمينية، يتم تحديد الكميات الخاصة بها بإضافة كاشف سيشكل مشتقًا ملونًا. إذا كانت كميات الأحماض الأمينية تزيد على 10 نانومول، يمكن استخدام النينهيدرين لذلك ؛ يعطي لونًا أصفرًا عندما يتفاعل مع البرولين، والأرجواني الزهري مع الأحماض الأمينية الأخرى. تركيز الأحماض الأمينية يتناسب مع امتصاص المحلول الناتج. مع كميات صغيرة جدا، وصولا إلى 10 pmol ، يمكن تشكيل مشتقات الفلورسنت باستخدام الكواشف مثل (OPA)أو fluorescamine.
قد يستخدم اشتقاق العمود قبل استخدام كاشف Edman لإنتاج مشتق تم اكتشافه بواسطة ضوء UV. تتحقق حساسية أكبر باستخدام كاشف يولد مشتق الفلورسنت. تخضع الأحماض الأمينية المشتقة لكروماتوجراف طور معكوس، وعادة ما تستخدم عمود سيليكا C8 أو C18 وتدرج شطف محسن. يتم الكشف عن الأحماض الأمينية المستحدثة باستخدام كاشف للأشعة فوق البنفسجية أو الفلورية ومناطق الذروة بالمقارنة مع تلك الخاصة بالمعايير المشتقة من أجل تحديد كل حمض أميني في العينة.
