books applications in biochemistry
If you do not find what you're looking for, you can use more accurate words.
التطبيقات بالكيمياء الحيوية (Info)
تم استخدام Coomassie Brilliant Blue R-250 لأول مرة لتصور البروتينات في عام 1964 من قبل Fazekas دي سانت غروث والزملاء. تم فصل عينات البروتين الكهربائي على ورقة خلات السليولوز. ثم تم غمر الورقة في حمض sulfosalicylic لإصلاح أشرطة البروتين ومن ثم نقلها إلى محلول للصبغة.
بعد ذلك بعامين في عام 1965 ، استخدم ماير ولامبرت Coomassie Brilliant Blue R-250 لصبغ عينات البروتين بعد الفصل الكهربي في هلام بولي أكريلاميد. لقد غمروا الهلام في محلول الصبغة المحتوي على ميثانول وحمض أسيتيك وماء. كما صبغ الصباغ هلام بولي أكريلاميد وكذلك البروتين، من أجل تصور مجموعات البروتين التي يحتاجونها لتدمير الجل الذي فعلوه electrophoretically. أفادت المنشورات اللاحقة أنه يمكن القضاء على هلام بولي أكريلاميد بنجاح باستخدام محلول حمض الأسيتيك.
وجاء التقرير الأول لاستخدام شكل "G" للصبغة لتصور أشرطة البروتين في المواد الهلامية بولي أكريلاميد في عام 1967 ، حيث تم تذويب الصبغة في محلول حمض الأسيتيك المحتوي على ميثانول. اكتشف لاحقا أنه يمكن تلوين عصابات البروتين دون تلطيخ بولي أكريلاميد باستخدام غرواني من شكل "G" للصبغة في محلول حمض ثلاثي كلوروسيتيك لا يحتوي على ميثانول. باستخدام هذا الإجراء لم يعد من الضروري نزع الجل. تستخدم الصيغ الحديثة عادة غروًا من الصبغة "G" للصبغة في محلول يحتوي على حمض الفوسفوريك أو الإيثانول (أو الميثانول) وكبريتات الأمونيوم (أو كبريتات الألومنيوم).
يستخدم اختبار برادفورد الخصائص الطيفية لـ Coomassie Brilliant Blue G-250 لتقدير كمية البروتين في محلول. يضاف عينة من البروتين إلى محلول الصبغة في حمض الفوسفوريك والإيثانول. في الظروف الحمضية، تكون الصبغة لونًا بنيًا، ولكن عند الارتباط بالبروتين يتم إنتاج الشكل الأزرق للصبغة. يقاس الامتصاص البصري للمحلول بطول موجة 595 نانومتر. الصباغة ملحوظة بسبب مستوى الحساسية العالية، 5 ميكروغرام من البروتين كافية لتمييز الفرق. ومع ذلك، من بين عيوب الطريقة تباين تطور اللون مع بروتينات مختلفة، يتغير تغير الامتصاص لكل وحدة كتلة من البروتينات مع نوع البروتين.
عند الارتباط ببروتين، فإن جزيئة الصبغة Coomassie Brilliant Blue G-250 المشحونة سلبياً تعطي شحنة سالبة إجمالية للبروتين. يمكن استخدام هذه الخاصية لفصل البروتينات أو مجمعات البروتين باستخدام الرحلان الكهربائي للهلام بولي أكريلاميد تحت ظروف عدم تغيير الطبيعة في تقنية تدعى Blue Native PAGE. إن قابلية الحركة المعقدة في هلام بولي أكريلاميد تعتمد على حجم مركب البروتين (أي الوزن الجزيئي) وعلى كمية الصبغة المرتبطة بالبروتين.
ويمكن استخدام تلوث الأزرق Coomassie كطريقة تلطيخ للتحكم في التحميل. تحليل لطخة غربية. يتم تطبيقه كصبغ ما قبل الأجسام المضادة الأيوني.
