كتب human blood clotting factors

وكان يتم إنتاج عوامل تخثر الدم البشري، قبيل تطوير وتصديق منظمة الأغذية والزراعة على وسيلة إنتاج عوامل تخثر الدم البشري باستخدام تقنيات الاتحاد الدنوي، من الد المتبرع به والذي كان يتم فحصه بصورةٍ غير متكافئةٍ بحثاً عن فيروس نقص المناعة المكتسب (الإيدز). مما جعل عدوى الإيدز خطراً مهدداً للمرضى الذين يعانون من مرض الناعور والذين يحصلون على عواملٍ لتخثر الدم البشري:

أشارت معظم التقارير إلى أنه من 60% إلى 80% من مرضى الناعور والذيت تعرضوا للعامل الثامن والتي تركزت فيما بين 1979 و1084 م كانت عينات دمهم المفحوصة إيجابية المصل لفيروس نقص المناعة البشري المكتسب بواسطة فحص اللطخة الغربية. ومع حلول مايو 1988، تعرض أكثر من 659 من مرضى الناعور إلى فيروس الإيدز...

كما كان أول عاملٍ لتخثر الدم البشري تم إنتاجه بكمياتٍ كبيرةٍ ملحوظةٍ باستخدام تقانة الاتحاد الدنوي هو العامل التاسع (بالإنجليزية: Factor IX)‏، والذي تم إنتاجه باستخدام خلايا مبيض حيوان الهمستر الصيني المهندس جينياً في عام 1986. ونتيجة افتقارهم إلى خريطة الجين البشري، حصل الباحثون على سلسلةٍ معروفةٍ من الحمض النووي للعامل التاسع فاحصين الأحماض الأمينية للعامل التاسع:

نتيجة التسلسل الجزئي للعامل التاسع عالي النقاء.... استطاع ذلك العامل إنتاج تسلسلاتٍ للأحماض الأمينية لبناء وتكوين مسابير أو مجسات الأليغنوكليوتيد (بالإنجليزية: oligonucleotide probes)‏.

ثم اسْتُخْدِمَ بعد ذلك التسلسل المعروف للحمض النووي للعامل التاسع في البحث عن شفرة المورث (الجين) للعامل التاسع في معامل الحمض النووي الموجودة في الكبد البشري، حيث أنه من المعروف أن عوامل التخثر الدموي ينتجها الكبد البشري:

وهنا تم تركيب وتسمية مسبار الأليغنوكليوتيد الفريد ... المتماثل مع mRNA العامل التاسع ...حيث استخدم المسبار الناتج في مسح معمل DNA مزدوج الحصار بالكبد البشري ... وتحتوى تسلسلات الحمض النووي المكتملة ثنائية الحصار والخاصة بـ cDNA (المرتبط) ... كل أنواع تسلسلات التشفير COOH– الطرفية للكودن الحادي عشر (11) وسلسلة 3’ الغير متحولة تماماً.

حيث اسْتُخْدِمَت سلسلة cDNA تلك في إيجاد باقي تسلسلات الحمض النووي الباقية المكونة لجين العامل التاسع من خلال البحث عن الحمض النووي في الكرموسوم إكس:

تم تجهيز مكتبة جينومية من كرموسوم xxxx البشري ... كما تم مسحها باستخدام مسبار أو مجس cDNA للعامل التاسع. هذا وتم عزل الفاج المؤتلف المهجن، تنقية الصحيفة، وعزل الحمض النووي. هذا وقد تم رسم خريطة المعوقات، والتحليل الجنوبي، وكذلك تعرف الحمض النووي المسلسل المسموح للخمسة مضامين المحتوية على الفاج المؤتلف – والتي تراكبت في التسلسلات العامة الشائعة، ثم تم تشفير كل جين العامل التاسع 35kb.

ثم تم تضمين البلازميدات المحتوية على جين العامل التاسع جنباً إلى جنب مع البلازميدات مع الجين الخاص بالتشفير لمقاومة methotrexate، داخل خلايا مبيض الهمستر الصيني من خلال انتقال العدوى. وتضمنت عملية انتقال العدوى حقن الحمض النووي إلى داخل الخلية حقيقية النواة. وعلى عكس العملية المماثلة لتكوين البكتريا، فإن الحمض النووي المنتقل بالعدوى ليس متحداً أو متداخلاً بصورةٍ عاديةٍ داخل جينوم الجلية، ومن ثم فلا يتم تمريره غالباً إلى الأجيال المتلاحقة بواسطة انقسامات الخللية. ومن ثم، وللحصول على عملية انتقالٍ للعدوى "ثابتة ومستقرة"، هذا ولابد من انتقال الجين الذي يُضفي ميزة الإنعاش الهامة كذلك، مما يؤدي إلى زيادة أعداد الجينومات التي انتقل حمضها النووي بالعدوى، كما أن الخلايا التي لم يندمج حمضها النووي يتم القضاء عليها. وفي حالة هذه الدراسة، فقد حفز "نمو تركيزات methotrexate المتزايدة " من إحياء وانعاش ثبات الخلايا المنتقلة بالعدوى، كما أنه تم وقف نمو الخلايا الأخرى وسحقها.

أنتجت خلايا مبيض الهمستر الصيني التي تعرضت للعدوى الانتقالية بصورةٍ مستقرةٍ كمياتٍ ملحوظةٍ من العامل التاسع، والذي تبين أن له خصائصاً جوهريةً تجلطية (تساعد على التخثر)، وذلك على الرغم من أن ذلك بدرجةٍ أقل عن العامل التاسع المنتج في الدم البشري:

تم قياس النشاط الخاص للعامل التاسع المؤتلف على أساس القياس المباشر للنشاط التخثري ... حيث كان النشاط الخاص للعامل التاسع المؤتلف 75 وحدة/ مليغرام.... مقارنةً بـ 150 وحدةً/ مليغرام للعانل التاسع المشتق من البلازما...

وفي عام 1992، صدقت منظمة الأغذية والزراعة العالمية على العامل التاسع المنتَج بواسطة خلايا مبيض الهمسير الصيني المعدلة وراثياً، والذي يمثل أول عامل تخثرٍ للدم تم اعتماده، بعد إنتاجه باستخدام تقانة حمض نووي مؤتلف.