books copy process
If you do not find what you're looking for, you can use more accurate words.
عملية النسخ (Info)
الانتساخ الفاشل، أو النسخ، يحدث عندما يتم محاصرة إنزيم رنا بوليميراز RNA polymerase بشكل متكرر في أحد المحفزات متسببًا في عمليات انتساخ قصيرة فاشلة (أو عمليات نسخ، عادة طولها من 2 إلى 12 عملية انتقال نووي). أثناء عملية النسخ الفاشلة، لا يترك إنزيم رنا بوليميراز المحفز. أما خلال عملية النسخ الطبيعية، فإن إنزيم الرنا بوليميراز يخضع في نهاية المطاف إلى تغيير متعلق بتكوين جزئي إلى مستقر، مجمّع استطالة متتابع، وتسمى هذه العملية هروب المحفز، ويستمر النسخ بعد ذلك حتى يتم الوصول إلى إشارة الانتهاء. يجري إعداد المحفزات الصناعية أو أشرطة التحفيز الفاشلة "APC" (APCs) وإنزيمات الرنا بوليميراز الفاشلة التي يطلق عليها "Abscriptases" التي تحاصر إنزيم رنا بوليميراز في أحد المجمعات الفاشلة، وتقوم بشكل متكرر بتجميع الآلاف من أليجوكليوتيد المتماثلة القصيرة في الدقيقة. تتم برمجة كل شريط من أشرطة التحفيز الفاشلة لعمل نسخة مختلفة ذات طول وتسلسل محددين والتي يمكن فصلها وتحديد كميتها. تتم عملية النسخ بنجاح حيث تنتج ثلاثي النيوكليوتيدات بمعدل 1000 إلى 10000 نسخة في الدقيقة.
يتم إنتاج مجموعة موحدة من ثلاثي النيوكليوتيدات في وجود بادئ ثنائي النوكليوتيد (مثل GpA) وريبونوكليوزيد-ثلاثي الفوسفات (مثل GTP) المشفرة بواسطة شريط التحفيز الفاشل المرفق. في هذا المثال، يحمل شريط التحفيز الفاشل تسلسل الحمض النووي DNA CpTpC ويقوم بتشفير التخليق المتكرر لريبونوكليوتيد GpApG. ستنتج خطوة البلمرة الواحدة نسخة من ثلاثي النوكليوتيد إضافة إلى بيروفوسفات غير العضوية. يمكن رصد أي من ثلاثي النوكليوتيد أو البيروفوسفات الناتجة أو كليهما أو خطوة البلمرة نفسها وتحديد كميتها. يتم رصد النسخ غير المعدلة وتحديد كميتها بواسطة LC-MS (الاستشراب السائل – قياس الطيف الكتلي أو RTLC "الاستشراب السريع للطبقة الرقيقة")، ولكن استخدام النوكليوتيدات المعدّلة كركائز للنسخ يسمح بحدوث أنواع أخرى من الرصد (الكهربائي الشعيري، التفلور). إن إجراء تعديلات على النهاية الخامسة 5’ لبادئ ثنائي النوكليوتيد تنتج نسخ فلورية. إن ربط البيوتين بالنهاية الخامسة 5’ يسمح بالتقاط النسخ.
يمكن رصد المؤشرات الحيوية الجزيئية مثل الرنا RNA والبروتين والحمض النووي DNA (بما في ذلك مثيلة الحمض النووي DNA،, والتكبير والحذف والإدخال ونقل الأماكن والطفرات) وتحديد كميتها بواسطة إدخال رابطة تساهمية من شريط التحفيز الفاشل إلى الهدف. يمكن ربط أشرطة مختلفة من APC، التي تقوم بتشفير نسخ مختلفة، بالأهداف المختلفة لأغراض تعدد الرصد. يتم تحديد كمية النسخ الناتجة أثناء عملية النسخ وتوفير قياس مباشر لحجم المؤشر الحيوي الذي تم ربط شريط التحفيز الفاشل به.
