كتب sample preparation
اذا لم تجد ما تبحث عنه يمكنك استخدام كلمات أكثر دقة.
تحضير العينة (معلومة)
تحضير العينة بالطريقة المناسبة ضروري للحفاظ على مورفولوجيا الخلية، وبنية الأنسجة، واستضداد الحواتم المستهدفة. لذا يجب جمع الأنسجة وتثبيتها وتقطيعها على نحو ملائم. يُستخدم غالبًا محلول بارافورمالدهيد لتثبيت الأنسجة، ويمكن استخدام طرق أخرى.
تحضير المقاطع النسيجية
بعد تحضير الأنسجة يمكن تقطيعها أو استخدامها بالكامل، تبعًا للغرض من التجربة والنسيج المدروس. قبل التقطيع، يمكن أن تغمر العينة النسيجية في وسط معين، مثل شمع البارافين أو الأوساط المبرِدة. يمكن الحصول على المقاطع النسيجية باستخدام مجموعة متنوعة من الأدوات، الأكثر استخدامًا بينها المشراح، وناظم البرد، والمشراح ذو النصل المهتز. تقسم العينات عادة في هيئة مقاطع تتراوح سماكتها بين 3 و5 ميكرومتر. توضع المقاطع بعد ذلك على شرائح، وتجفف باستخدام غسولات كحولية ذات تراكيز متزايدة (على سبيل المثال 50%، 75%، 90%، 95%، 100%)، وتُمسح باستخدام مادة منظفة مثل الزيلين ثم تُصور تحت المجهر.
اعتمادًا على طريقة تثبيت الأنسجة وحفظها، ربما تحتاج العينة إلى خطوات إضافية لتصبح الحواتم متاحة للارتباط بالأجسام المضادة، بما في ذلك نزع البارافين واسترداد المستضد. بالنسبة للأنسجة المثبتة بالفورامالين والمغمورة في وسط البارافين، غالبًا ما يكون استرداد المستضد أمرًا ضروريًا، ويتضمن معالجة مسبقة للمقاطع النسيجية بالحرارة أو البروتياز. تؤثر هذه الخطوات في تلون الأنسجة أو عدم تلونها.
الحد من التلون المناعي غير النوعي
تبعًا لنوع الأنسجة وطريقة الكشف عن المستضد، ربما يلزم حصر أو إخماد البيوتين الداخلي أو الإنزيمات الداخلية، على التتالي، قبل التلوين باستخدام الجسم المضاد. على الرغم من أن الأجسام المضادة تُظهر رغابة تفضيلية نحو الحواتم النوعية، يمكن أن ترتبط جزئيًا أو بشكل ضعيف بالمواقع الموجودة على بروتينات غير نوعية (تسمى أيضًا المواقع التفاعلية) التي تشبه مواقع الربط المعروفة على المستضد المستهدف. يسبب التلوين غير النوعي اصطباغ خلفية المحضر النسيجي بصورة كبيرة، ما يعيق الكشف عن المستضد المستهدف. للحد من تلون الخلفية في الكيمياء النسيجية المناعية والكيمياء الخلوية المناعية وطرق التلوين المناعي الأخرى، تُحتضن العينات بعد إضافة مادة واقية تحصر المواقع التفاعلية التي يمكن أن ترتبط بها الأجسام المضادة الأولية والثانوية. تشمل الواقيات الشائعة المصل الطبيعي والحليب الجاف خالي الدسم وألبومين المصل البقري والجيلاتين. تتوفر الواقيات التجارية ذات التراكيب المسجلة تجاريًا وتكون أكثر كفاءةً. تتضمن طرق التخلص من تلون الخلفية تخفيف الأجسام المضادة الأولية أو الثانوية، وتغيير وقت أو درجة حرارة الاحتضان، واستخدام نظام كشف مختلف أو جسم مضاد أولي مختلف. يجب أن تُستخدم أنسجة معروفة التعبير عن المستضد لتكون عنصر تحكم إيجابي وأنسجة معروفة بعدم التعبير عن المستضد لتكون ضوابط سلبية، ويجب اختبار النسيج المدروس بنفس الطريقة دون إضافة الجسم المضاد الأولي (والأفضل، امتصاص الجسم المضاد الأولي) وذلك في سياق مراقبة الجودة.
