بمجرد تحديد وظيفة البروتين المتحول من الممكن تسلسل / تنقية / استنساخ المناطق التي تحيط الإدراج بالطرق التالية:
عكس PCR
المادة الرئيسية: عكس PCR
- عزل الجينوم الذباب.
- الخضوع خلاصة خفيفة (باستخدام إنزيم [إنزيم 1] معروف بعدم القطع في جين المراسل)، مما يعطي أجزاء من بضعة كيلوباسيس، وعدد قليل مع الإدراج والحمض النووي المرافق له.
- الذاتي يربط خلاصتها (تركيز الحمض النووي المنخفض لضمان الربط الذاتي) إعطاء مجموعة مختارة من شظايا الحمض النووي الدائري، وعدد قليل مع الإدراج والحمض النووي المرافق لها.
- .قطع البلازميدات في مرحلة ما في جين المراسل (مع إنزيم [انزيم 2] المعروف لقطع نادرا جدا في الحمض النووي الجينومي، ولكن من المعروف أن في الجينات مراسل).
- باستخدام التمهيديات لأقسام الجينات المراسل، يمكن تضخيم الحمض النووي لتسلسل.
- عملية القطع، وربط الذات وإعادة قطع يسمح التضخيم من المناطق يحيط من الحمض النووي دون معرفة تسلسل. يمكن رؤية النقطة التي حدث فيها الربط من خلال تحديد موقع القطع [الإنزيم 1].
بلازميد الإنقاذ
- عزل الجينوم الذباب.
- الخضوع لخلاصة خفيفة (باستخدام إنزيم [إنزيم 1] معروف بقطعه في الحدود بين جين المراسل وجين مراسل الإشريكية القولونية وتسلسلات البلازميد)، مما يعطي أجزاء من بضعة كيلوباسيس، وعدد قليل من مع مراسل الإشريكية القولونية، وتسلسلات البلازميد والحمض النووي المحيط به.
- .يربط الذاتي خلاصة (تركيز الحمض النووي منخفضة لضمان الربط الذاتي) إعطاء مجموعة مختارة من شظايا الحمض النووي دائرية، وعدد قليل مع مراسل القولونية E. ، وتسلسل البلازميد والحمض النووي يحيط بها.
- أدخل البلازميدات في خلايا الإشريكية القولونية E. (على سبيل المثال عن طريق الكهربة).
- حدد بلازميدة لجين علامة E. القولونية اختيار. فقط إدراج ناجحة من بلازميدة مع تسلسل "التدبير المنزلي" بلازميد سوف تعبر عن هذا الجين.
- ويمكن استنساخ الجين لمزيد من التحليل.
المصدر: wikipedia.org