كتب concepts in mammalian cell culture

عزل الخلايا

يمكن عزل الخلايا من أنسجة الجسم الحي بعدة طرق. يمكن تنقية الخلايا بسهولة من الدم. ومع ذلك، فإن الخلايا البيضاء هي وحدها القادرة على النمو في المزرعة الخلوية. يمكن عزل الخلايا من الأنسجة الصلبة عن طريق هضم المكونات خارج الخلوية باستخدام الإنزيمات مثل كولاجيناز، التريبسين، أو البرونايز، قبل تحريك الأنسجة لتحرير الخلايا إلى المعلق. بدلا من ذلك، يمكن وضع قطع من النسيج في وسائل النمو، والخلايا التي تنمو خارج المتاحة للثقافة. تُعرف هذه الطريقة بالثقافة الزاحفة.

تُعرف الخلايا التي يتم تربيتها مباشرةً من أحد الموضوعات بالخلايا الأولية. باستثناء بعض مشتقة من الأورام، فإن معظم ثقافات الخلية الأولية لها عمر محدود.

اكتسب خط خلوي ثابت أو خلد القدرة على التكاثر إلى أجل غير مسمى إما عن طريق الطفرات العشوائية أو التعديل المتعمد، مثل التعبير الاصطناعي لجين التيلوميراز. تم تأسيس العديد من خطوط الخلايا كممثل لأنواع خلايا معينة.

الحفاظ على زراعة الخلايا الثديية

بالنسبة لغالبية الخلايا الأولية المعزولة، فإنها تخضع لعملية الشيخوخة وتتوقف عن الانقسام بعد عدد معين من التجمعات السكانية بينما تحتفظ بصفة عامة بسلامتها (موصوفة حد هايفليك).

تزرع الخلايا وتحافظ عليها في درجة حرارة مناسبة وخليط الغاز (عادة، 37 درجة مئوية، 5 ٪ CO2 لخلايا الثدييات) في حاضنة الخلايا. تختلف ظروف الزرع بشكل كبير لكل نوع من أنواع الخلايا، ويمكن أن يؤدي اختلاف الظروف لنوع معين من الخلايا إلى ظهور أنماط ظاهرية مختلفة.

بالإضافة إلى مزيج درجة الحرارة والغاز، فإن العامل الأكثر شيوعًا في أنظمة الاستزراع هو وسط نمو الخلايا. يمكن أن تختلف وصفات وسائط النمو في درجة الحموضة، وتركيز الجلوكوز، وعوامل النمو، ووجود العناصر الغذائية الأخرى. وغالبًا ما تستمد عوامل النمو المستخدمة لتكميل وسائل الإعلام من مصل الدم الحيواني، مثل مصل بقري جنيني (FBS)، مصل بقرة العجل، مصل الخيول، ومصل الخنازير. أحد مضاعفات هذه المكونات المشتقة من الدم هو احتمال تلوث الثقافة بالفيروسات أو البريونات، خاصة في تطبيقات التقنية الحيوية الطبية. الممارسة الحالية هي تقليل أو القضاء على استخدام هذه المكونات حيثما كان ذلك ممكنا واستخدام حلالة الصفيحات الدموية (hPL). هذا يزيل القلق من التلوث بين الأنواع عند استخدام حلالة الصفيحات الدموية مع الخلايا البشرية. ظهرت حلالة الصفيحات الدموية كبديل آمن وموثوق به كبديل مباشر لـ مصل بقري جنيني أو مصل حيواني آخر. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام الوسائط المحددة كيميائيًا لإزالة أي أثر مصل (إنساني أو حيواني)، ولكن لا يمكن دائمًا تحقيق ذلك باستخدام أنواع خلايا مختلفة. تشمل الاستراتيجيات البديلة الحصول على دم حيواني من البلدان التي تعاني من مخاطر دنيا مثل جنون البقر/ اعتلال دماغي إسفنجي معدي، مثل الولايات المتحدة وأستراليا ونيوزيلندا، واستخدام مركزات المغذيات المنقاة المشتقة من المصل بدلا من مصل الحيوانات الكاملة لزراعة الخلايا.

تلعب كثافة التصفيح (عدد الخلايا لكل حجم من وسط الثقافة) دورًا حاسمًا في بعض أنواع الخلايا. على سبيل المثال، انخفاض كثافة الطلاء يجعل الخلايا الحبيبية تبدي إنتاج هرمون الاستروجين، في حين أنه عندما تكون كثافة التصفيح أعلى يجعلها تظهر كخلايا اللوتين في الدم المنتجة للبروجسترون.

يمكن زراعة الخلايا إما في حالة التعليق أو اللزوجة ملتصقة. بعض الخلايا تعيش بشكل طبيعي في التعليق، دون أن تكون مرتبطة بسطح، مثل الخلايا الموجودة في مجرى الدم. هناك أيضا خطوط الخلايا التي تم تعديلها لتكون قادرة على البقاء في الاستنبات المعلقة حتى يمكن زراعتها إلى كثافة أعلى مما تسمح به شروط الالتصاق. تتطلب الخلايا الملتصقة سطحًا، مثل زراعة الأنسجة البلاستيكية أو الجزيئات الدقيقة، والتي قد تكون مغلفة بمكونات خارج الخلية (مثل الكولاجين والليمينين) لزيادة خصائص الالتصاق وتقديم إشارات أخرى مطلوبة للنمو والتمايز. معظم الخلايا المشتقة من الأنسجة الصلبة ملتصقة. نوع آخر من الاستنبات الملتصقة هو الثقافة النمطية، والتي تنطوي على نمو الخلايا في بيئة ثلاثية الأبعاد (3-D) بدلا من أطباق الثقافة ثنائية الأبعاد. يعتبر نظام الثقافة ثلاثية الأبعاد هذا أكثر تشابهًا من الناحية الفيزيولوجية والبيولوجية في النسيج الحيوى، ولكن من الصعب تقنيًا الحفاظ عليه بسبب العديد من العوامل (مثل الانتشار).